我们日常中所使用的载玻片都是为76mmx26mm的大小，厚度大约在2mm以内。可以在一般的光学显微镜底下使用。但是如果我们用相差显微镜和暗场显微镜的时候，那么载玻片的厚度要求就必须要严格了，必须要求载玻片厚度必须在1mm左右，在用暗视场的显微镜的时候一般的暗视场聚光器上都标有载玻片的厚度，一般在1mm~1.2mm左右。
还有一种特殊的载玻片我们成为凹玻片，就是载玻片中间有一个圆形凹穴，滴上培养液后可以进行细胞的活体观察，但是同时因为凹面的关系，我们在使用相差显微镜的时候透射光会发生歪曲，所以不建议在相差显微镜上使用。
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